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技術文章

一文直接教會你康寧基質膠的使用方法

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  康寧基底膜基質可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細胞,厚層凝膠法允許您在三位基質內培養(yǎng)細胞,薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復雜的蛋白質層,您可以在其上培養(yǎng)細胞。您的選擇基于您想要實現(xiàn)的最終結果,無論是細胞生長、附著還是分化。
  薄層凝膠法
  1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質。使用預冷的移液管,將康寧基底膜基質混合至均勻。
  2. 將培養(yǎng)板放置在冰上,以 50 µl/cm2向生長表面加入康寧基底膜基質。
  3 將培養(yǎng)板放置在 37 °C ,30 分鐘。
  4. 如果有必要的話,請在使用無血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結合的材料。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
  厚層凝膠法
  1.  依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質。使用預冷的移液管,將康寧基底膜基質混合至均勻。
  2. 將培養(yǎng)板放置在冰上。向康寧基底膜基質中加入細胞并使用預冷的移液管懸浮。以150-200 µl/cm2向生長表面加入康寧基底膜基質。
  3. 將培養(yǎng)板放置在 37°C,30 分鐘。現(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了。細胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。
  薄層包被法
  1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質。使用預冷的移液管,將康寧基底膜基質混合至均勻。
  2. 使用無血清培養(yǎng)基將康寧基底膜基質稀釋到需要的濃度。對于您的應用程序,您應該完成以經(jīng)驗為主的研究來確定您的最適包被濃度。
  3. 向被包被的容器中加入稀釋的康寧基底膜基質。加入的量應該足以容易地覆蓋整個生長表面。在室溫下培養(yǎng) 1 個小時。
  4. 吸出未結合的材料并使用無血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。
  細胞復蘇:
  康寧中性蛋白酶(貨號 354235),康寧細胞復蘇溶液(貨號 354253)。使用康寧細胞復蘇溶液在冰上 7 小時內解聚康寧基底膜基質能夠實現(xiàn)將生長在康寧基底膜基質上的細胞有效地復蘇,或者使用中性蛋白酶,考慮到連續(xù)培養(yǎng),中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細胞。

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